高效液相色譜在材料測試中的定性定量方法有(高效液相色譜在材料測試中的定性定量方法有哪些)

高效液相色譜法是利用高壓輸液泵將規(guī)定的流動(dòng)相泵入裝有填料的色譜柱中，對測試樣品進(jìn)行分離和測定的色譜方法。注入的測試樣品由流動(dòng)相帶入色譜柱。各組分在色譜柱中分離并進(jìn)入檢測器進(jìn)行檢測。色譜信號由積分器或數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)記錄和處理。

高效液相色譜法有以下方法：

1.定性分析

常用的定性方法主要包括但不限于利用保留時(shí)間定性、利用光譜相似性定性、利用質(zhì)譜檢測器提供的質(zhì)譜信息定性。

利用保留時(shí)間定性

保留時(shí)間（tR）定義為組分進(jìn)樣到柱后出現(xiàn)該組分最大響應(yīng)值的時(shí)間，即從進(jìn)樣到某一組分色譜峰出現(xiàn)峰所需的時(shí)間。時(shí)間通常以分鐘(min)為單位來衡量，用于反映分離組分的性質(zhì)差異。通常以相同色譜條件下待測組分與對照品的保留時(shí)間是否一致作為待測組分定性測定的依據(jù)。

在相同色譜條件下，待測組分的保留時(shí)間與對照品的保留時(shí)間不應(yīng)有顯著差異；保留時(shí)間不同的兩個(gè)色譜峰屬于不同的化合物，但保留時(shí)間相同的兩個(gè)色譜峰可能并不總是可識別的。屬于同一化合物，鑒定未知物質(zhì)時(shí)應(yīng)特別注意。

若改變流動(dòng)相組成或更換色譜柱類型，待測組分的保留時(shí)間仍與對照品一致，可進(jìn)一步證實(shí)待測組分與對照品的保留時(shí)間一致。物質(zhì)是同一種化合物。

當(dāng)待測成分沒有對照品（保留時(shí)間tR，1）時(shí)，可將樣品中的另一種成分或另一種已知成分添加到樣品中作為對照品（保留時(shí)間tR，2），保留時(shí)間（RRT）作為定性（或定位）方法。種類下，除非另有說明，相對保留時(shí)間通常是指待測組分的保留時(shí)間相對于主成分的保留時(shí)間的比值，按下式計(jì)算，作為未調(diào)整的保留時(shí)間，不扣除死區(qū)時(shí)間。

如果需要計(jì)算調(diào)整后的保留時(shí)間減去死區(qū)時(shí)間，應(yīng)在相應(yīng)品種下注明。

利用光譜相似性進(jìn)行定性

化合物的全波長掃描紫外-可見區(qū)域光譜提供了一些有價(jià)值的定性信息。待測成分的光譜與對照品光譜的相似度可用于輔助定性分析。當(dāng)二極管陣列檢測器開啟一定波長范圍內(nèi)的掃描功能時(shí)，可以獲得更多的信息，包括色譜信號、時(shí)間、波長的三維色譜圖，可用于輔助定性分析和峰純度分析。

還應(yīng)該注意的是，具有不同光譜的兩個(gè)色譜峰代表不同的化合物，但具有相似光譜的兩個(gè)色譜峰不一定歸因于同一化合物。

利用質(zhì)譜檢測器提供的質(zhì)譜信息來定性

利用質(zhì)譜檢測器提供的色譜峰的分子質(zhì)量和結(jié)構(gòu)信息進(jìn)行定性分析，比僅僅利用保留時(shí)間或增加光譜相似度進(jìn)行定性分析，可以獲得更多、更可靠的信息。它不僅可以用于已知物質(zhì)的定性分析。還可以提供未知化合物的結(jié)構(gòu)信息。

2.定量分析

內(nèi)標(biāo)法

按照產(chǎn)品正文的規(guī)定，精密稱?。咳。φ掌泛蛢?nèi)標(biāo)物，分別配制溶液。準(zhǔn)確稱取每種物質(zhì)適量，混合制成對照溶液，用于測定校準(zhǔn)因子。注入一定量的樣品，記錄色譜圖。測定對照品和內(nèi)標(biāo)物的峰面積或峰高，按下式計(jì)算校正系數(shù)：

然后取各品種下含內(nèi)標(biāo)物的供試品溶液，注入樣品，記錄色譜圖，測定供試品中待測成分與內(nèi)標(biāo)物的峰面積或峰高，根據(jù)為以下公式：

采用內(nèi)標(biāo)法可以避免樣品前處理和進(jìn)樣量誤差對測定結(jié)果的影響。

外標(biāo)法

按各品種規(guī)定，精密稱取對照品和供試品，制成溶液，各精密量取，進(jìn)樣，記錄色譜，測定對照品的含量溶液和待測物質(zhì)溶液。對于某種物質(zhì)的峰面積（或峰高），按以下公式計(jì)算含量：

式中符號含義同上。

采用外標(biāo)法測定時(shí)，宜采用手動(dòng)進(jìn)樣器定量環(huán)或自動(dòng)進(jìn)樣器進(jìn)樣。

帶校正因子的主成分自對比法

測量雜質(zhì)含量時(shí)，可采用帶有校正因子的主成分自控法。建立方法時(shí)，按各品種規(guī)定，精密稱取（量?。┕┰嚻泛蛯φ掌穼φ掌愤m量，配制供試品雜質(zhì)校正因子溶液，注入樣品。記錄色譜圖，然后按下列公式計(jì)算待測雜質(zhì)的校正因子。

還可以準(zhǔn)確稱取主成分對照品和雜質(zhì)對照品適量，配制成不同濃度的溶液，進(jìn)樣，記錄色譜圖，繪制主成分濃度與雜質(zhì)濃度的回歸曲線其峰面積，從而將校正因子計(jì)算為主成分回歸線的斜率與雜質(zhì)回歸線的斜率之比。

校正因子可以直接加載到每個(gè)產(chǎn)品項(xiàng)中，用于校正所測得的雜質(zhì)峰面積。對于需要校準(zhǔn)和計(jì)算的雜質(zhì)，通常以主成分為參考，采用相對保留時(shí)間定位，并將其值加載到每個(gè)產(chǎn)品項(xiàng)中。向下。

測定雜質(zhì)含量時(shí)，按各品種規(guī)定的雜質(zhì)限量，將供試品溶液稀釋成與雜質(zhì)限量相當(dāng)?shù)娜芤鹤鳛閷φ杖芤?，進(jìn)樣，記錄色譜圖，調(diào)整縱坐標(biāo)范圍（至噪聲）如果需要的話?？山邮芩綖橄薅龋箤φ杖芤褐鞒煞稚V峰的峰高達(dá)到滿量程的10%25%左右。除另有規(guī)定外，含量小于0.5%的雜質(zhì)，峰面積測定值的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）應(yīng)小于10%；對于含量為0.5%2%的雜質(zhì)，峰面積測定值的RSD應(yīng)小于5%；對于含量大于2%的雜質(zhì)，峰面積測定值的RSD應(yīng)小于2%。然后，取供試品溶液和對照溶液適量，分別注入。除另有規(guī)定外，供試品溶液的記錄時(shí)間應(yīng)為主成分色譜峰保留時(shí)間的2倍。應(yīng)測定供試品溶液色譜上各雜質(zhì)的峰面積，乘以相應(yīng)的校正因子，與對照品比較。比較溶液主要成分的峰面積，計(jì)算出各雜質(zhì)的含量。

無校正因子主成分自對比法

測量雜質(zhì)含量時(shí)，如果無法獲得待測雜質(zhì)的校正因子，或者可以忽略校正因子，也可以采用不加校正因子的主成分自控法。按上述(3)制備對照溶液，進(jìn)樣，調(diào)整縱坐標(biāo)范圍，計(jì)算峰面積的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差，取供試品溶液和對照品溶液各適量，分別注入樣品。除另有規(guī)定外，供試品溶液的記錄時(shí)間應(yīng)為主成分色譜峰保留時(shí)間的2倍。應(yīng)測定供試品溶液色譜圖中各雜質(zhì)的峰面積，并與對照溶液主要成分的峰面積進(jìn)行比較。依法計(jì)算雜質(zhì)含量。

面積歸一化法

按各產(chǎn)品規(guī)定，配制供試品溶液，進(jìn)樣一定量，記錄色譜圖。測定色譜圖上除溶劑峰外的各峰面積和總色譜峰面積，并計(jì)算各峰面積占總峰面積的百分比。用于雜質(zhì)檢驗(yàn)時(shí)，由于儀器響應(yīng)的線性限制，峰面積歸一化法一般不適用于痕量雜質(zhì)的檢驗(yàn)。測試狗